Tinción para Hongos | scientist-site

4. Tinción para Hongos

Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium yBacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años. Algunas de las bacterias productoras de endosporas son patógenas para el hombre, por lo que su estudio y observación son de enorme interés.

Fundamento:

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción.

La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente.Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.

Tincion:

Se emplearán cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las esporas. Esta tinción es delicada en su realización y para poder obtener unos resultados satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.

1. Preparar los frotis bacterianos indicados.

2. Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min.

Nota: evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste se evapora; es importante que la muestra no se seque.

3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

4. Teñir con safranina 1 min.

5. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

6. Secar la preparación.

7. Observar la preparación al microscopio.

Tinción Azul de Lactofenol o azul algodón

La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos.

Es una tinción simple (un sólo colorante) y como tal está basada en la afinidad del colorante por componentes de las células, en este caso por las estructuras fúngicas.

El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial para observar dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos en los cultivos por aislamiento.

El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los cultivos, juntos a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)
El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por decirlo de algún modo, una película que las protege provocado por un cambio de gradiente osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.
El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios de los hongos microscópicos

imagen.

Procedimiento:

Sobre un porta limpio y seco depositaremos 2 gotas de azul de .
Cortaremos un trozo de cinta celo y la pegaremos en el extremos del asa estéril.
Con cuidado pasaremos el extremo del celo por el borde exterior de la colonia.
Pegaremos la cinta celo en el portaobjetos que tiene el colorante retirando con cuidado el asa.
Añadiremos una gota de colorante sobre el celo.
cubriremos la preparación con un cubreobjetos.
Observaremos al microscopio.

Tinción Con Naranja De Acridina

• Transferir una gota del cultivo a un portaobjetos limpio y desengrasado, dejar secar al aire.

• Fijar con etanol al 100%, cubriendo el frotis durante 5 min.

• Eliminar el etanol y colocar 100 ml de naranja de acridina durante 3min.

Eliminar el exceso del colorante con etanol al 70%.

• Observar en un microscopio de epifluorescencia con un filtro azul, emisión a 490 nm.

Tinción Diferencial

Tinción De Ziehl-Neelsen (Aar)

• Se utiliza para diferenciar las bacterias denominadas ácido alcohol resistente del No ácido alcohol resistente

• Algunas bacterias poseen, en su pared celular, ciertos ácidos grasos de cadena larga que les confiere la propiedad de resistir la decoloración con alcohol ácido, tras haber sido teñidas con colorantes básicos.

• Esta tinción requiere un calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene la capa cerosa formada por ácido micólico.