Marzo-Mayo,2011

Algunas técnicas utilizadas en el diagnóstico.

Diferentes métodos de la patología diagnóstica.

Ejemplos de algunas técnicas , utilizadas para maximizar el diagnóstico.

Autor: Berrocal, A.

De forma breve explicaremos las diferentes tipos de técnicas o herramientas, que se utilizan en la patología moderna, con la intención de ayudar a obtener el objetivo final. Definimos dicho objetivo el determinar la causa o etiología de la enfermedad. Únicamente explicaremos con un poco mas de detalle el concepto de las TINCIONES ESPECIALES. Las otras técnicas solo las explicaremos brevemente.

A. EL INMUNODIAGNÓSTICO.

Es un técnica que detecta antígenos( inmunología) o reacciones químicas en los tejidos o células. Se puede hacer en material ya fijado (parafina), es la inmunohistoquímica. En el caso de preparaciones citológicas se llama inmunocitoquímica.

Glomérulo normal, teñido con Vimentina, observe que las células mesangiales son positivas(rojo). Por el contrario, las tubulares, no tiñen

Uno de los grandes usos de esta técnica, es en la oncología diagnostica, ya que en cierto grupos de tumores indiferenciados, el conocer el origen celular de esa células neoplásicas. esto tiene mucho valor especialmente, si la neoplasia se va a tratar de forma no quirúrgica o como coadyuvante post-cirugía cirugía(drogas). Ejemplo, este es un rabdomiosarcoma cardiaco teñido con actina, vea que tiñen tanto las miofibrillas normales como las tumorales.

B. LA MICROSCOPIA ELECTRÓNICA.

Como se explico anteriormente, los marcadores de la inmunohistoquímica, son proteínas especificas, estructurales o secretadas por las células o los tejidos. En cambio en la microscopia electrónica, se trata de estructuras o componentes subcelulares como organelas, ejemplo mitocondrias o constituyentes extra celulares (matriz).

A pesar de su gran aporte para el entendimiento de las estructuras normales y alteradas, su uso, especialmente en el diagnostico diario, ha disminuido. Observe en la siguiente foto, las microvellosidades, mitocondrias, uniones celulares, etc.

C. CITOMETRIA DE FLUJO

Es una técnica de mucho valor, la cual permite estudiar a las células de forma individual, cuando ellas pasan por un rayo laser. Para las personas que quieran leer mas, hay mucha información (artículos), en internet.

D. El PCR para el Reacomodo de los Receptores de Antígenos.

Es una técnica muy nueva, que se esta usando mucho en humanos. En medicina veterinaria, también se esta utilizando, especialmente en centros especializados de algunas universidades de los Estados Unidos( desconozco si también en otros países).

Es lo que se conoce como la clonación de células. Se utiliza, en neoplasia linfoides, en casos, en donde es muy difícil, incluso con inmunohistoquímica, saber si los linfocitos presentes, son en respuesta a una reacción inflamatoria, o si son neoplásicos, ya que los neoplásicos son homogéneos, por originarse de una única célula transformada.

E. TÉCNICAS O TINCIONES ESPECIALES.

Muy probablemente es un concepto o término, con el que la mayoría de ustedes, están muy familiarizados, ya que con cierta frecuencia los llamo o les escribo, para informarles que a su caso necesitamos hacerle un tinción especial.

Son técnicas que se pueden utilizar de forma rutinaria, tanto en la citopatología, como en la histopatología. Este termino de “especial”, agrupa a tinciones realizadas por HISTOQUíMICA: Es un grupo de tinciones diferentes a la tinción estándar o rutinaria, conocida como Hematoxilina-Eosina(H&E) en el caso de la histopatología o el Giemsa o otros, en el caso de la citología. Dentro de sus principales ventajas de estas tinciones especiales están:

  • La mayoría son relativamente rápidas( 3-4 días).
  • Los protocolos son bastantes estándar y reproducibles.
  • Son muy aceptadas, incluso artículos indizados( publicaciones).
  • Son mas baratas que la inmunohistoquímica. Pero son menos especificas.
  • La principal desventaja, es que a veces su reacción son poco predecibles.

SU USO. Se emplean para demostrar grupos específicos de químicos, o de algunas sustancias, por ejemplo mielina, glicógeno etc. También para visualizar la morfología de ciertos microorganismos, por ejemplo hongos, bacterias. ALGUNOS EJEMPLOS DE LAS MAS COMÚNMENTE UTILIZADAS

Para sustancias intra y extracelulares.

Sustancia extracelular. El Rojo Congo, se usa en casos de sospecha de amiloidosis.

Observe en las tres imágenes siguientes(glomérulos). La primera esta teñida con la tinción de rutina( Hematoxilina-Eosina). Las otras dos es con rojo Congo, observe como el material es un poco rojo( positivo).

Glomérulo normal, con HE
Glomérulo normal, con HE
Glomérulo, observe el material dentro del ovillo. H.E
Glomérulo, observe el material dentro del ovillo. H.E
Tinción de rojo Congo. Amiloidosis
Tinción de rojo Congo. Amiloidosis

Sustancia intra celular. Pared Intestinal. COLITIS HISTIOCÍTICA, especialmente, aunque no exclusiva de bóxers.

Tinción de HE, vea el aspecto espumoso de los histiocitos
Tinción de HE, vea el aspecto espumoso de los histiocitos.
Tinción de PAS, vea el material granular.
Tinción de PAS, vea el material granular.
Tricromero de Masson, se utiliza para diferenciar entre fibras de colágeno y musculo
Tricromero de Masson, se utiliza para diferenciar entre fibras de colágeno y musculo.
Tricromero de Masson, se utiliza para diferenciar entre fibras de colágeno y musculo
Von Kossa, en casos de precipitaciones de calcio.
Von Kossa, en casos de precipitaciones de calcio.
Observe la mineralización( negra) de la membrana basal, vea que es muy difícil distinguirla con la tinción de HE.
Observe la mineralización( negra) de la membrana basal, vea que es muy difícil distinguirla con la tinción de HE (foto superior).
Azul de Toluidina, en caso de gránulos metacromáticos.
Azul de Toluidina, en caso de gránulos metacromáticos.

Para microorganismos.

Gram, para distinguir entre bacterias Gram+ o Gram –

Caso de una Nocardiosis. Foto con HE.
Caso de una Nocardiosis. Foto es con HE.
Con
Con Gram, vea los filamentos, que son azules( positiva).

Giemsa, para protozoarios y algunas bacterias. También en citología diagnostica( Histopatovet). Vea los varios ejemplos de su uso:

En neoplasias. MASTOCITOMA. Vea los gránulos.
A. En neoplasias. MASTOCITOMA. Vea los gránulos.
En infecciosas. HISTOPLASMOSIS CUTÁNEA. Observe que el hongo se ve dentro del macrófago. También, la técnica permite ver bacterias, fuera de las células.
B. En infecciosas. HISTOPLASMOSIS CUTÁNEA. Observe que el hongo se ve dentro del macrófago. También, la técnica permite ver bacterias, fuera de las células.
En inflamatorias no infecciosas. Vea grandes cantidades de polimorfos, junto a células grande epiteliales.
C. En inflamatorias no infecciosas. Vea grandes cantidades de polimorfos, junto a células grande epiteliales.

Grocott (tinción de plata), especialmente Hongos, etc.

Miocardio, con una Prototecosis.  Con HE. Vea que los organismos, son poco visibles. A diferencia de la tinción siguiente, que es un Grocott.
Miocardio, con una Prototecosis. Con HE. Vea que los organismos, son poco visibles. A diferencia de la tinción siguiente, que es un Grocott.

PAS, es para hongos. También, en sustancias intra-celulares.

Un Ejemplo, un folículo piloso, con hifas. Tinción HE
Un Ejemplo, un folículo piloso, con hifas. Tinción HE.
Mismo Folículo con PAS
Un Ejemplo, un folículo piloso, con hifas. Tinción HE.

Ziehl-Neelsen o FITE, especialmente para bacterias del grupo de las acido resistentes(Micobacterias). En la primera, los macrófagos, tienen mucho citoplasma espumoso. En el FITE se ven como “bananitos”.

Comentario final: algunas de estas tinciones especiales, las hace el laboratorio con el que HISTOPATOVET trabaja. Otras tinciones, al igual que algunas inmunohistoquímicas, las enviamos a un centro de diagnostico especializado en Michigan, Estados Unidos.

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